分光光度計(jì)就是利用分光光度法對物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器。由于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量樣本量很小,于是超微量分光光度計(jì)應(yīng)運(yùn)而生。超微量分光光度計(jì)近年來已經(jīng)替換普通的分光光度計(jì)成為分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室的新寵,廣泛應(yīng)用于生命科學(xué)實(shí)驗(yàn)室蛋白質(zhì)組學(xué)和基因組學(xué)等領(lǐng)域。
超微量分光光度計(jì)的工作原理是利用分光光度法對物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析的儀器,常用于核酸,蛋白定量以及細(xì)菌生長濃度的定量。無論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門,紫外可見分光光度計(jì)督有廣泛而重要的應(yīng)用。
超微量分光光度計(jì)常用于定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。核酸的zui高吸收峰的吸收波長260nm。每種核酸的分子構(gòu)成不一,因此其換算系數(shù)不同。定量不同類型的核酸,事先要選擇對應(yīng)的系數(shù)。如:1OD的吸光值分別相當(dāng)于50μg/ml的dsDNA,37μg/ml的ssDNA,40μg/ml的RNA,30μg/ml的Olig。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,從而得出相應(yīng)的樣品濃度。
超微量分光光度計(jì)對工作環(huán)境的要求如下。
?、賰x器應(yīng)安放在干燥的房間內(nèi),使用溫度為5-35℃.相對濕度不超過85%。
?、趦x器應(yīng)放置在堅(jiān)固平穩(wěn)的工作臺上,且避免強(qiáng)烈的振動(dòng)或持續(xù)的振動(dòng)。
?、凼覂?nèi)照明不宜太強(qiáng),且應(yīng)避免直射日光的照射。
?、茈娚炔灰酥苯酉騼x器吹風(fēng),以防止光源燈因發(fā)光不穩(wěn)定而影響儀器的正常使用。
?、荼M量遠(yuǎn)離高強(qiáng)度的磁場、電場及發(fā)生高頻波的電器設(shè)備。
?、薰┙o儀器的電源電壓為AC220V±22V,頻率為50Hz±1Hz,并必須裝有良好的接地線。推薦使用功率為1000w以上的電子交流穩(wěn)壓器或交流恒壓穩(wěn)壓器,以加強(qiáng)儀器的抗干擾性能。
⑦避免在有硫化氫等腐蝕性氣體的場所使用。