PCR,中文稱(chēng)為聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng),其實(shí)是一種DNA的快速擴(kuò)增技術(shù),PCR技術(shù)通過(guò)兩個(gè)短的稱(chēng)為引物的DNA小片段和一種耐熱的酶的作用,可以在3個(gè)小時(shí)內(nèi)把特定的DNA量提高1000萬(wàn)倍。PCR技術(shù)引起了分子生物學(xué)研究的一場(chǎng)革命,推動(dòng)了微觀(guān)領(lǐng)域的生物學(xué)研究?,F(xiàn)在PCR儀已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用于生命科學(xué)研究、食品衛(wèi)生、醫(yī)療、法醫(yī)及環(huán)境監(jiān)測(cè)等諸多方面。
在進(jìn)行PCR儀中控溫模式設(shè)定時(shí),一般有三個(gè)選項(xiàng):Block、Tube及Probe。下面就這三種模式種簡(jiǎn)單的介紹:
PCR儀的溫度傳感器一般是在模塊下面的,也就是說(shuō)儀器實(shí)際能夠控制的是模塊的溫度,Block模式指的就是儀器以控制Block的溫度為目的,也就是說(shuō)你輸入95度5分鐘,則模塊的溫度達(dá)到95度后開(kāi)始計(jì)時(shí),5分鐘后完成。這是最基本的控溫模式。
但是,實(shí)際上我們輸入95度5分鐘是希望PCR管內(nèi)的溫度達(dá)到95后開(kāi)始計(jì)時(shí)5分鐘。PCR儀器開(kāi)發(fā)人員可以先將模塊溫度控制到97度(比如而已,如果不超過(guò)95度,管內(nèi)溫度可以很長(zhǎng)時(shí)間才能達(dá)到95度或根本達(dá)不到),過(guò)幾秒鐘后,等到管內(nèi)溫度達(dá)到95度,再將模塊溫度降到95度。這樣做既達(dá)到了管內(nèi)溫度到95度,且速度較快。但過(guò)沖的溫度量與時(shí)間及PCR管的導(dǎo)熱系數(shù)、PCR反應(yīng)液的體積都有關(guān)系。這就是各個(gè)PCR儀廠(chǎng)家的核心技術(shù)了。這種控溫方式就稱(chēng)為T(mén)ube模式。
如果直接將一個(gè)溫度傳感器加入PCR管中,直接測(cè)量PCR管內(nèi)的溫度不是也可以嗎?這就是Probe模式,也就是在一個(gè)不進(jìn)行PCR反應(yīng)的管內(nèi)放入一個(gè)溫度探頭,儀器根據(jù)溫度探頭測(cè)到的溫度來(lái)控制PCR管內(nèi)的溫度。但傳感器的數(shù)據(jù)檢測(cè)、分析及反饋是需要時(shí)間的,這種控制模式不一定比Tube模式好,而且如果反應(yīng)體積發(fā)生變化時(shí),就比較麻煩了。
因此,如今的PCR儀就都是Block和Tube兩種模式了。如果是正常的PCR反應(yīng),一般選Tube模式。如果是長(zhǎng)時(shí)間保溫且對(duì)溫度過(guò)沖要求很高,則可以考慮用Block模式。