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分析超微量分光光度計進行核酸定量時讀書不穩(wěn)定的原因
來源:公司新聞    更新時間:2019-05-24    瀏覽:1573次
     NanoDrop one超微量分光光度計是一類很重要的分析儀器 ,無論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域 ,還是在化工、醫(yī)藥、環(huán)境檢測、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門都有廣泛而重要的應(yīng)用。NanoDrop one超微量分光光度計就是利用分光光度法對物質(zhì)進行定量定性分析的儀器,常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。超微量分光光度計已成為現(xiàn)代分子生物實驗室常規(guī)儀器。常用于核酸,蛋白定量以及細菌生長濃度的定量。
    核酸的定量是NanoDrop one超微量分光光度計使用頻率很高的一個功能,可以定量溶于緩沖液的寡核苷酸,單鏈、雙鏈DNA,以及RNA。每種核酸的分子構(gòu)成不一,因此其換算系數(shù)不同,定量不同類型的核酸,事先要選擇對應(yīng)的系數(shù)。測試后的吸光值經(jīng)過上述系數(shù)的換算,從而得出相應(yīng)的樣品濃度。
    測試前,選擇正確的程序,輸入原液和稀釋液的體積,然后測試空白液和樣品液,但是實驗并非一帆風(fēng)順。讀數(shù)不穩(wěn)定可能是實驗者比較頭痛的一個問題。
  NanoDrop one超微量分光光度計允許吸光值在一定范圍內(nèi)變化,即儀器有一定的準確度和度。另外,還需考慮核酸本身物化性質(zhì)和溶解核酸的緩沖液的pH值,離子濃度等:在測試時,離子濃度太高,也會導(dǎo)致讀數(shù)漂移,因此建議使用pH值一定、離子濃度較低的緩沖液,如TE,可大大穩(wěn)定讀數(shù)。    樣品的稀釋濃度同樣是不可忽視的因素:由于樣品中不可避免存在一些細小的顆粒,尤其是核酸樣品。這些小顆粒的存在干擾測試效果。為了減少顆粒對測試結(jié)果的影響,要求核酸吸光值至少大于0.1A,吸光值在0.1-1.。在此范圍內(nèi),顆粒的干擾相對較小,結(jié)果穩(wěn)定。從而意味著樣品的濃度不能過低或者過高。
    后是操作因素,如混合要充分,否則吸光值太低,甚至出現(xiàn)負值,混合液不能存在氣泡,空白液無懸浮物,否則讀數(shù)漂移劇烈,必須使用相同的比色杯測試空白液和樣品,否則濃度差異太大。換算系數(shù)和樣品濃度單位選擇一致,不能采用窗口磨損的比色杯。 
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